定量的動物医療PCRアッセイの精度を確保する方法は？

ちょっと、そこ！動物の医療PCRアッセイのサプライヤーとして、これらのテストの精度を確保することがどれほど重要であるかを直接見ました。動物医学の世界では、正確なPCRアッセイは、疾患の診断、監視治療、および動物の健康管理全体に大きな違いをもたらす可能性があります。それでは、これらのテストが可能な限り正確であることを確認する方法を説明しましょう。

動物医療PCRアッセイの基本を理解する

まず最初に、すぐに何を調べましょう動物医療PCRアッセイは。 PCR、またはポリメラーゼ連鎖反応は、DNAの特定のセグメントを増幅する手法です。動物医学の文脈では、血液、組織、糞などの動物のサンプルにウイルス、細菌、寄生虫などの病原体の存在を検出するために使用されます。

このプロセスにはいくつかのステップが含まれます。まず、DNAがサンプルから抽出されます。次に、特定のプライマーがDNAに追加されます。これらのプライマーは、ターゲットDNA配列に結合するように設計されています。その後、DNA鎖を分離するために熱サイクルが適用され、プライマーが結合してから新しいDNA鎖を合成します。このサイクルは複数回繰り返され、ターゲットDNAの量が指数関数的に増加します。最後に、増幅されたDNAは、通常は蛍光またはその他の方法を介して検出されます。

サンプルの収集と取り扱い

動物の医療PCRアッセイの精度を確保するための最も重要な手順の1つは、適切なサンプルの収集と取り扱いです。サンプルが正しく収集されないか、汚染されている場合、誤った結果につながる可能性があります。

サンプルを収集するときは、適切なツールとテクニックを使用することが不可欠です。たとえば、血液サンプルを収集する場合、汚染物質の導入を避けるために、針と注射器は滅菌する必要があります。サンプルも適切なサイトから収集する必要があります。組織サンプルの場合、周囲の組織からの汚染のリスクを最小限に抑えるために、きれいな生検法を使用する必要があります。

収集後、サンプルを適切に処理する必要があります。それらは適切な温度で保管し、できるだけ早く実験室に輸送する必要があります。サンプルが正しく保存または輸送されていない場合、サンプルのDNAが低下し、不正確な結果につながる可能性があります。たとえば、一部のサンプルは、DNAの完全性を維持するために輸送中に氷上または凍結する必要がある場合があります。

試薬の品質管理

動物の医療PCRアッセイの精度を確保するためのもう1つの重要な要素は、試薬の品質管理です。プライマー、酵素、バッファーなどのPCRプロセスで使用される試薬は、高品質である必要があります。

プライマーは、ターゲットDNA配列に特異的にバインドするように慎重に設計する必要があります。プライマーが特異的でない場合、サンプル内の他のDNA配列に結合し、誤検知につながる場合があります。 TAQポリメラーゼなどのPCRプロセスで使用される酵素も高品質であり、適切な活性を持っている必要があります。酵素活性が低すぎると、PCR反応が効率的に機能しない可能性があり、その結果、偽陰性が生じます。

試薬を適切に保管することも重要です。ほとんどの試薬は、安定性を維持するために低温で保存する必要があります。試薬を使用する前に、有効期限と劣化の兆候を確認する必要があります。

実験室環境

実験室環境は、動物の医療PCRアッセイの精度にも大きな影響を与える可能性があります。実験室は清潔で汚染物質がない必要があります。 PCRは非常に敏感な手法であり、少量の汚染でさえ誤った結果につながる可能性があります。

実験室には、サンプルの準備、PCRセットアップ、およびPCR後の分析のための別々の領域が必要です。これは、プロセスの異なるステップ間の相互汚染を防ぐのに役立ちます。たとえば、サンプルが準備されている領域は、PCR反応が設定されている領域とは別にする必要があります。また、実験室は、DNAを含む可能性のあるエアロゾルを除去するための適切な換気も必要です。

オペレータートレーニング

動物医療PCRアッセイを実行するオペレーターは、正確性を確保する上で重要な役割を果たします。サンプルの収集や取り扱いからデータ分析まで、PCRプロセスのあらゆる面でよく訓練される必要があります。

オペレーターは、PCRプロセスで使用される機器と試薬に精通している必要があります。彼らは、PCRマシンを正しく操作する方法と、発生する可能性のある問題をトラブルシューティングする方法を知っている必要があります。また、汚染を防ぎ、独自の安全を確保するために、適切な実験室の安全手順で訓練されるべきです。

オペレーターがスキルと知識を維持するために、定期的なトレーニングと習熟度テストを実施する必要があります。これは、オペレーターが追加のトレーニングを必要とする可能性のある領域を特定するのに役立ちます。

データ分析と解釈

PCRアッセイが完了すると、データを正しく分析して解釈する必要があります。これには、結果を適切なコントロールと参照値と比較することが含まれます。

各PCR実行には、陽性と陰性のコントロールを含める必要があります。陽性対照にはターゲットDNA配列が含まれている必要がありますが、ネガティブコントロールは必要ありません。陽性対照が肯定的な結果を生成しない場合、またはネガティブコントロールが正の結果を生成しない場合、それは汚染や誤った試薬の使用など、PCR反応の問題を示します。

PCRアッセイの結果も参照値と比較する必要があります。たとえば、アッセイが特定の病原体を検出するために使用される場合、結果は、集団の病原体の既知の有病率と比較する必要があります。結果が予想される範囲外である場合、さらなる調査が必要になる場合があります。

アッセイの検証

臨床環境で動物の医療PCRアッセイを使用する前に、検証する必要があります。検証では、多数のサンプルでアッセイをテストして、その精度、感度、および特異性を決定します。

精度とは、アッセイの結果が真の値にどれだけ近いかを指します。感度とは、サンプルに存在するときにターゲットDNAを検出するアッセイの能力を指します。特異性とは、標的DNAをサンプル内の他のDNA配列と区別するアッセイの能力を指します。

検証プロセスには、さまざまな種類のサンプルとさまざまな条件下でアッセイをテストして、その堅牢性を確保する必要があります。たとえば、アッセイは、異なる動物種のサンプルや疾患のさまざまな段階でテストする必要があります。

継続的な監視と改善

アッセイが検証され、使用されていた後でも、その精度を確保するために継続的な監視と改善が必要です。これには、アッセイの結果を定期的にレビューし、内部監査を実施し、外部の品質評価プログラムに参加することが含まれます。

結果を確認することにより、データの傾向やパターンを特定できます。たとえば、偽陽性または偽陰性の数が増加している場合、アッセイまたは実験室の処置の問題を示す可能性があります。内部監査は、実験室の手順を改善する必要がある可能性のある領域を特定するのに役立ちます。

外部の品質評価プログラムには、結果をテストして比較するために、外部研究所にサンプルを送信することが含まれます。これは、研究所の結果が他の研究所と一致し、アッセイが正確に実行されていることを保証するのに役立ちます。

結論

動物医療PCRアッセイの精度を確保することは、サンプルの収集や取り扱いからデータ分析と解釈まで、多くのステップを含む複雑なプロセスです。のサプライヤーとして動物医療PCRアッセイ、私たちは、高品質の製品を提供し、お客様のテストの正確性を確保するために顧客をサポートすることに取り組んでいます。

あなたが関わっているなら動物臨床検査または動物臨床検査また、動物の医療PCRアッセイ製品に興味があります。おしゃべりしたいと思います。特定のニーズと、正確で信頼できる結果を達成するのに役立つ方法について説明してください。

参照

• Kwok、S。、＆Higuchi、R​​。（1989）。 PCRでの誤検知を回避します。自然、339（6221）、237-238。
• Mackay、Im、Arden、Ke、＆Nitsche、A。（2002）。ウイルス学のリアルタイムPCR。核酸研究、30（6）、1292-1305。
• テイラー、GR（1991）。ポリメラーゼ連鎖反応：基本原理と自動化。診断分子微生物学：原理と応用、165-187。